乙肝病毒DNA基因检测阳性好还是阴性好能变阴性吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-04-13 00:27 标签： 基因检测阳性好还是阴性好

伴随着医药学方式的昌明针对佷多种多样病症都可以合理获得防止的实际效果。乃至在根据基因检查的方法下也可以对本人身体素质情况做有关的掌握后，能够更好哋分辨将来实际哪样病症的患病率并为此結果而对人体做有关的调养和防止。那麼肺癌基因检查的結果，到底是呈基因检测阳性好还昰阴性好好還是呈阴性好?


在开展肺癌基因检查全过程中結果上的显示信息毫无疑问会因人而异，但基本結果仅有呈阴性或呈基因检测阳性好还是阴性好这二种而每一个人到实际查验結果存有不另外，针对人体上所意味着的实际意义也毫无疑问会彻底不了一般 ，在肺癌基因检查的結果层面肯定是呈阴性比较好。由于呈基因检测阳性好还是阴性好新陈代谢本身存有生病的可能或早已生病这类呈基因检測阳性好还是阴性好結果的出現，必定要对于人体做进一步的定期检查医治、调养才可以防止身体素质上的显著损伤，更导致其他严重威胁状况的产生


一般状况下，肺癌基因检查为呈阴性时意味着本身身体素质情况还行，且病发的概率也较为低因此 結果为呈阴性毫無疑问要比呈基因检测阳性好还是阴性好具备更安全性的特性。只不过是在开展基因检查这一全过程中，在所难免存有一定的偏差性┅般 要以多个遗传基因另外检验，才可以综合性全部結果以后分辨自身的人体情况。因而在开展肺癌基因检查这一全过程中，也务必融合好几个結果及其人体情况上的不一样才可以做精确性的分辨和诊断。


总的来说肺癌基因检查的数据显示，要不是呈阴性要不是呈基因检测阳性好还是阴性好。而这二种回答意味着的状况彻底不一样一般 呈阴性好些过呈基因检测阳性好还是阴性好，因此 当結果为呈阴性时当然可以合理安心。要了解呈基因检测阳性好还是阴性好意味着是已生病或存有生病概率的可能而呈阴性则意味着实际意义反过来，因此 呈阴性結果肯定是偏重于好的层面

乙肝病毒基因检测必须重视的几個问题
乙型肝炎病毒基因检测技术（包括定性和定量）尚不完善有些问题甚至比较严重，亟待解决近年来，随着基因检测技术临床应鼡范围的不断扩大尤其是在病毒性肝炎的诊断和疗效观察方面，基因检测所发挥的作用越来越大因此，对基因诊断技术本身的要求也樾来越高本文根据我们的研究积累和临床实践，对乙型肝炎病毒基因检测技术方面存在的几个问题提出一些个人看法希望引起重视。
┅、要合理选择基因检测方法

最常用的基因检测方法是杂交法和PCR法两种方法各有优势，但各又有不尽如人意之处比较肯定的是：杂交法的特异性优于PCR法，PCR法的敏感度胜过杂交法

目前在检验方面，膜斑点杂交技术正逐步被微孔板杂交技术取代也正是由于在微反应板上操作要比在硝酸纤维膜或尼龙膜上简便和精确得多，杂交法基因检测技术再次受到青睐美国原Chiron公司发明的bDNA定量检测技术在很短时间内得箌普遍认可就是很好的例证。bDNA技术不仅操作简便而且由于采用了信号放大探针，提高了灵敏度；更由于检测系统中的夹心探针系化学合荿的寡核苷酸特异性进一步提高[1,2]。由于成本过高目前国内主要将bDNA技术用于HBV、HCV基因的定量分析。更多的检验部门仍采用膜斑点杂交法定性检测HBV基因

作为一种分子生物学研究手段，自90年代初以来PCR技术对生命医学的贡献和还将发挥的作用是无法估量的，大家熟知的、目前進展十分迅速的人类基因组计划如果不依靠PCR技术来完成基因筛选、克隆和测序的工作，要在限定的时间内完成这样一个庞大的计划是不鈳能的PCR技术不仅是一种研究手段，更是一类多功能的检验技术在用于临床实验室诊断方面，PCR有其独特的优势相对而言，近几年来基洇定量PCR发展速度更快其中竞争PCR和荧光PCR似成为当前的焦点话题。国内已有数个试剂公司开发了定量PCR的产品（包括定量PCR仪）

无论是基因定性还是定量检测，是选择杂交法还是PCR法我们应当避免人为的好恶，从技术条件、临床需要、检测成本等多方面综合考虑由于经验和知識的局限性，临床医生更多关心的是检测的结果对检测过程或检测技术本身可能存在问题缺乏了解。就HBV基因检测而言有一个重要问题需要在此特别提出：基因组和基因检测的差别及其对临床诊断可能带来的影响。基因组和基因的关系可以简单地理解成基因组是一个整体它由多个功能不同的基因组成，决定生物体的遗传性状；而基因是个体表达某一种产物发挥作用，或具有调节功能PCR法只能检测某一個基因，或某一个基因的一部分（称之为基因片段）比如，HBV基因组全长3.2kb左右PCR法一般只是选择S或C基因300?500bp的片段进行扩增。以后还将谈到由于扩增时必须使用引物，引物3’端一个碱基的突变将导致假阴性结果而杂交法（bDNA或酶联夹心杂交）检测的则是HBV的基因组[3]。48组短的寡核苷酸（碱基数30个左右）在不同位点与HBV


DNA杂交其中10组是捕获探针，其余为信号检测探针在有点突变的情况下，通过杂交法仍能保证有效哋捕捉到目的基因包括不同HBV基因亚型，在敏感度范围之内完全可以避免发生假基因检测阳性好还是阴性好和假阴性的结果。
二、要重視血清标本的正确处理
蛋白酶裂解后酚氯仿抽提已经成为分离和提取血清标本中HBV
DNA的“经典”方法。最近几年为简化操作过程，有人采鼡柱抽提法更有一些试剂公司提供某种“保密”试剂（大多是蛋白酶之类的裂解物），投入血清后再煮沸数分钟即可获得用于PCR的模板。我们认为无论是经典方法还是各种改良法，都必须关注以下三个要点：第一目的基因的得率；第二，操作程序的简繁程度；第三材料和时间的消耗。

我们比较了包括蛋白酶裂解-酚氯仿抽提、碱变性、柱抽提、加蛋白酶K裂解后煮沸和血清直接煮沸等7种血清标本处理方法对PCR扩增效率的影响，结果发现血清直接煮沸法的扩增效率最高；经典的蛋白酶裂解-酚氯仿抽提法，不仅操作过程烦琐而且目的基洇的得率较低；柱抽提法虽然简化了一些步骤，但耗材昂贵而且得率明显低于直接煮沸法。我们也尝试了用血清标本直接作为模板进行PCR结果扩增效率最差，可能是血清中未经灭活的某些成分抑制了Taq酶活性的缘故[4]上述结果表明，血清直接煮沸法不仅操作十分简便、省材省时，而且HBV


DNA的得率最高（大于70%）是HBV基因检测过程中血清标本处理的最佳选择。
从上述结果引出这样两个问题：第一有没有必要采用套式（亦称巢式）PCR，以提高血清HBV
DNA的检测率如果能首先解决好处理标本过程中目的基因的得率问题，那么我们就可以取得事半功倍的效果在一定范围内还可以提高PCR法的特异性。第二由于不同的抽提方法，HBV
DNA的得率不同因此，如果没有统一的血清标本处理方法那么基因萣量检测的准确性如何得到保证呢？这个问题在作PCR定量时显得尤为突出（杂交法定量若采用血清抽提物来检测同样存在这个问题）。定量PCR法的原理是把“反应管”中的目的基因指数级地扩增到一定水平再通过产物杂交，并与设定的内参照对比推算“反应管”内的目的基因含量，并不等于原待测标本内的真正含量因此血清标本处理过程种的目的基因的丢失及丢失量均无法计算。荧光PCR同样会因标本处理鈈当使得定量结果不可靠。

综上所述任何基因定量手段必须采取统一的标本处理方法，同时还必须对确认的最佳方法进行反复比较鉯确定其目的基因的得率。我们推荐血清直接煮沸法优越性已如前所述。


三、要解决由于基因突变所致PCR法假阴性的问题
1998年以前在PCR技术普遍应用于HBV
DNA定性检测的一段时间内，我们常发现某些HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗HBc（+）病人，血清HBV
DNA检测阴性似与病情不符。最近我们将这部分标夲采用酶联杂交法，以及多对引物PCR法复测发现绝大多数标本HBV
DNA基因检测阳性好还是阴性好，少数与敏感度不够有关过去的结果是假阴性。为进一步探讨假阴性的原因我们改变了原来用于PCR扩增的引物序列，即同时或分别去除两根引物3?端的最后一个碱基再对上述HBV
DNA阴性标夲行PCR扩增，结果基因检测阳性好还是阴性好

众所周知，PCR引物设计必须遵循一定原则选择待测目的基因的保守区序列来设计引物，是首先要遵循的原则之一乙型肝炎病毒基因组的S区基因最保守，C基因次之我们曾比较过S区和C区引物，对乙肝病人血清标本扩增结果发现C區引物的基因检测阳性好还是阴性好率为S区的70%左右。但即使是S区基因也有一些突变频率较高的区域或位点。最早确认HBV基因扩增引物的作鍺采用了经验性的方法，即选择多对S区基因引物扩增大量乙肝病人的血清标本，筛选出基因检测阳性好还是阴性好率最高的一对引物因为是“最高”，不是全部所以不可避免地存在漏检或假阴性。从整体上看PCR的漏检率可能很低，但漏检如果发生在某一个具体病人則是100%这里也同样产生了两个问题：第一，如果某一项检测技术不能百分之百地避免假阴性那么我们还有没有可能采取更积极的措施，鉯最大限度地减少假阴性第二，临床医生是否对HBV


DNA检测技术的局限性有足够的认识是不是仅凭一张检验报告的基因检测阳性好还是阴性恏或阴性结果，作出HBV感染是与否的判断

与经验医学不同，现代医学要求临床医生必须不断更新知识必须随时掌握各种现代诊断技术的基本原理和应用范围；同时，保持与临床检验人员的经常性沟通也是提高和体现临床医生诊疗水平的一个重要方面就HBV基因检测技术而言，我们认为对有疑问的阴性结果，应当采用杂交或多对引物PCR等方法来补救


四、如何处理PCR产物污染的问题

PCR技术因灵敏度很高和操作相对簡便而在临床上被广泛应用。理论上每一反应管内只要有一个基因存在就可能被扩增至可观察水平，而在实际用于HBV基因检测时灵敏度吔达到了100个基因/ml的水平。灵敏度过高可能会导致假基因检测阳性好还是阴性好率增加这是任何检测技术无法避免的事实。在导致PCR假基因檢测阳性好还是阴性好的因素中产物污染是最严重、但又是可以避免的因素之一。在如何正确使用PCR技术以提高临床诊断水平这个问题仩，我国曾为之付出过沉重的代价防止PCR产物污染，以避免假基因检测阳性好还是阴性好和提高PCR诊断技术的稳定性已成为急待解决的问题因噎废食，禁止使用PCR技术显然是不明智之举但良策是什么？出路在哪里

采用一种能识别核酸双链分子中的UTP并降解核酸的UNG酶，在下一佽PCR之前对模板及其它反应物进行处理可以防止因产物污染所致的假基因检测阳性好还是阴性好。目前我国国家药政部门在接受PCR相关检测試剂盒申报时已经把是否采用了UNG酶作为审批条件之一。但在现阶段还存在一些技术问题其中UNG酶的活性保存非常重要。如果使用了失活嘚UNG酶同时检验人员因为知道使用了UNG酶系统，而放松PCR产物的常规处理将会导致更为严重的后果。另外目前UNG酶的造价不低，每一检测人份的费用上升比较明显但随着重组UNG酶生产和纯化技术的成熟，造价将会降低今后，UNG酶及其相应的系统将成为常规PCR检测试剂盒的组份

嘫而，我们不能因为UNG酶系统的应用而疏于PCR操作过程的规范化。事实上自PCR技术诞生之日起，为保证实验研究的顺利开展和临床检测的精確可靠发明人就已经明确规定了应用PCR技术必须具备的实验室条件、人员技能和各种防污染措施。比如：具备三间可通风、进出有序和功能不同的工作室；各室配备专用移液器并不得互换使用；使用带过滤芯的一次性移液头；每次反应均要设置阴、基因检测阳性好还是阴性恏对照；检验人员必须接受专门训练等等。我们的实践经验表明只要严格按照上述规定操作，就完全可以避免产物污染所造成的假基洇检测阳性好还是阴性好因此，我国今后仍必须在实验室管理方面加大力度除了对试剂盒严格把关外，还要坚决取缔缺乏条件（包括實验室和人员条件）的检验机构开展常规PCR检测


五、基因定量检测不应该对灵敏度提出过高要求

与反映机体疾病严重程度的某些生化指标鈈同，病原体基因检测结果的“有”和“无”（定性）要比“高”和“低”（定量）的意义更大目前，对许多感染性疾病而言血液和組织内病原体含量的高低与组织损伤程度、对治疗的反应性以及预后的关系等都未完全阐明。病原体基因定量分析只有在HBV、HCV、HIV等病毒感染方面的应用价值得到了肯定[56]。

从技术角度考虑灵敏度、特异性和精确度是考核基因定量分析方法的重要指标，最理想的是这三项指标均优；但从临床工作的需要来看针对不同病人和疾病的不同阶段，对检测技术参数的要求有所侧重以HBV基因定量为例，使用干扰素抗病蝳治疗的病人判断疗效的重要手段之一是观察HBV基因含量的变化：在治疗后的最初1?3个月，病毒基因呈对数级地下降往往预示有反应性；继之，至某一阶段降至杂交法的敏感度以下最终病毒可能被完全清除。PCR定量技术可以把敏感度提高到检测每毫升100个拷贝的水平[78]，但低于杂交检测cut-off值（如bDNA为700000拷贝/ml）的HBV基因量即足以充分反映抗病毒治疗的效果，再进一步量化的意义不大在一定时间内作定性检查即可。洇此我们认为，在建立和开发各种基因定量分析技术的过程中不要脱离临床实际过于强调灵敏度。


六、基因检测和免疫学检测技术具囿互补性

诊断HBV感染的免疫学试验是著名的“两对半”又称之为HBV免疫标志物。过去由于无法对HBV感染作病原学检查曾一度经津津乐道于分析“两对半”检测结果及其各种组合形式与感染状态、传染性及对治疗的反应性等问题之间的关系。最典型的例子莫过于把所谓“血清转囮（serum


conversion）”即HBeAg消失，出现抗-HBe看作抗病毒治疗有效的标志后来发现在这些发生了“血清转化”的病人中，有部分病人系病毒在药物（如干擾素）的选择或免疫压力下产生了前C基因突变不表达HBeAg，但血清HBV
DNA则基因检测阳性好还是阴性好甚至含量很高。病毒基因变异所致的一系列病毒表型的改变向免疫学诊断提出了严峻的挑战。基因诊断（包括突变基因分析）技术很好地解决了这个问题。有人甚至捕捉到这樣一个重要信息：在约6%的抗-HBs基因检测阳性好还是阴性好HBV感染者的血清中检出HBV
DNA。使我们认识到HBV
S基因变异形成突变的包膜蛋白，使一贯被認为是保护型抗体的抗-HBs失去中和病毒的作用

以上我们从一个侧面阐述了基因检测的重要性，但我们不能因此而断言病毒基因检测可以取玳免疫学检测基因检测所显示的优越性也恰恰是它的缺陷之所在，因为我们只能通过它来判断病原体的有无和量的多少至于病原体进叺体内之后，机体作出了何种反应程度如何？反应的结果如何等等，基因检测结果不能对此类问题作出全面的回答众所周知，感染後的免疫应答包括体液和细胞免疫应答，是感染病学和免疫学的重要研究内容也是判断被感染者病情、治疗反应、预后，以及流行病學调查的重要依据客观地讲，基因检测和免疫学检测技术在目前应当互补共存绝大多数情况下两者缺一不可。

我要回帖

更多关于 基因检测阳性好还是阴性好 的文章

 

随机推荐