构建质粒如何表达蛋白蛋白不表达怎么办

我是用pet30a+做表达载体构建的质粒洳何表达蛋白包括了两段要表达的基因,这两段基因前一个就是N端有ATG没有终止密码子后一个有ATG也有终止密码子,这样构建的质粒如何表達蛋白转化到大肠杆菌发现后面一段基因表达了,因为后一段是荧光蛋白菌诱导后有很强的荧光,不知道是量不够还是什么原因,SDS-PAGE看不絀条带这种情况,是融合表达还是跳过前面那段基因直接表达后面这段呢?两段外源基因都700bp左右请知道的兄弟姐妹们指点。
做WB还得費好多事有没有别的方法检测,电泳都看不到用NI柱也没分离到,什么原因啊

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